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CTC+ PCR
CTC分離和富集
結(jié)果分析
細(xì)胞裂解，提取核酸（DNA或者mRNA)
qPCR，ddPCR
根據(jù)PCR儀配套軟件，進(jìn)行分析
核酸試劑盒提取流出液中的核酸分子
設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行擴(kuò)增
循環(huán)腫瘤細(xì)胞分選儀
案例應(yīng)用：
臨床試驗(yàn)：
目的： 通過(guò)檢測(cè)黑色素瘤患者的CTC mRNA生物標(biāo)志物，可否用于轉(zhuǎn)移黑色素瘤患者進(jìn)行免疫檢查點(diǎn)抑制劑療效評(píng)估。
入組患者：56例黑色素瘤 III/IV期，計(jì)劃接受免疫治療（ipilimumab，nivolumab，pembrolizumab）的患者。
檢測(cè)分子： CTC的 mRNA 生物標(biāo)志物——MART1，TRP2，MAGEA3，PAX和GALNCT。
試驗(yàn)方案：
1.治療前，分離CTC，進(jìn)行mRNA生物標(biāo)志物檢測(cè)（cutoff≥ 2 mRNA分子）；
2.免疫治療后，定期采血，進(jìn)行CTC mRNA生物標(biāo)志物檢測(cè)，通過(guò)PFS， OS等評(píng)估CTC mRNA生物標(biāo)志物與療效的關(guān)系。同時(shí)，分離IV期患者的CTC進(jìn)行成球培養(yǎng)和RNA測(cè)序。
結(jié)論：臨床試驗(yàn)進(jìn)行中，數(shù)據(jù)待發(fā)表。
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